紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的類型很多,但可歸納為三種類型,即單光束分光光度計(jì)、雙光束分光光度計(jì)和雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)。
1、單光束分光光度計(jì)
經(jīng)單色器分光后的一束平行光,輪流通過(guò)參比溶液和樣品溶液,以進(jìn)行吸光度的測(cè)定。這種簡(jiǎn)易型分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,操作方便,維修容易,適用于常規(guī)分析。
2、雙光束分光光度計(jì)
經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡分解為強(qiáng)度相等的兩束光,一束通過(guò)參比池,一束通過(guò)樣品池。光度計(jì)能自動(dòng)比較兩束光的強(qiáng)度,此比值即為試樣的透射比,經(jīng)對(duì)數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長(zhǎng)的函數(shù)記錄下來(lái)。
雙光束分光光度計(jì)一般都能自動(dòng)記錄吸收光譜曲線。由于兩束光同時(shí)分別通過(guò)參比池和樣品池,還能自動(dòng)消除光源強(qiáng)度變化所引起的誤差。
3、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)
由同一光源發(fā)出的光被分成兩束,分別經(jīng)過(guò)兩個(gè)單色器,得到兩束不同波長(zhǎng)1和2 的單色光;利用切光器使兩束光以一定的頻率交替照射同一吸收池,然后經(jīng)過(guò)光電倍增管和電子控制系統(tǒng),后由顯示器顯示出兩個(gè)波長(zhǎng)處的吸光度差值。
對(duì)于多組分混合物、混濁試樣(如生物組織液)分析,以及存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下,利用雙波長(zhǎng)分光光度法,往往能提高方法的靈敏度和選擇性。利用雙波長(zhǎng)分光光度計(jì),能獲得導(dǎo)數(shù)光譜。通過(guò)光學(xué)系統(tǒng)轉(zhuǎn)換,使雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)能很方便地轉(zhuǎn)化為單波長(zhǎng)工作方式。如果能在1和2處分別記錄吸光度隨時(shí)間變化的曲線,還能進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究。